Práctica LVII :P4 (27/04/2015)

DETERMINACIÓN SÉRICA DEL GRUPO AB0

Fundamento.
Cuando hacemos reaccionar el suero del paciente con hematíes conocidos del grupo A y del B, solo habrá aglutinación en el caso de ser enfrentado a hematíes con antígeno diferente a los hematíes propios del paciente. En esta práctica hemos utilizado plasma en lugar de suero.

Materiales.

• Tubos de centrifuga.
• Pipeta pasteur.
• Centrifuga.
• Reloj.
• Rotulador de vidrio.
• Vaso de precipitado.
• Gradilla.

Reactivos.

• Hematíes del grupo A1.
• Hematíes del grupo A2.
• Hematíes del grupoB.
• Hematíes del grupo 0.
• Hematíes de la sangre problema.

Muestra.

Plasma, obtenido centrifugando la sangre a 2500 durante 5 minutos.

Procedimiento.

Lo primero que realizamos es el lavados de los hematíes.

Para ello depositamos 1 ml de sangre y lo completamos con 3 ml de solución salina, lo agitamos y lo centrifugamos a 2000 rpm durante 4 minutos. Después desechamos el sobrenadante y volvemos a realizar el paso anterior 2 veces más. En la última centrifugación que realizamos desechamos el sobrenadante y preparamos hematíes al 5%. En un tubo depositamos 5 gotas (250 microlitros) de los hematíes lavados y 5 ml de suero fisiológico lo agitamos y así obtenemos una suspensión al 5 %.

Esta suspensión de hematíes al 5 % lo tenemos que hacer con sangre del grupo sanguíneo A1,A2, B y 0.

Para evitar falsos negativos, mantenemos el plasma en el baño de agua a 56 ºC durante 10 minutos, con ello inactivamos la muestra y evitamos fenómenos de hemólisis debido al complemento.

Después rotulamos 5 tubos de hemólisis, uno con la letra A1, otro con la letra A2, otro con B , otro con 0 , otro con C y para compensar la centrifuga rotulamos otro tubo repitiendo alguna de las letras.

 A estos 6 tubos le depositamos dos gotas de plasma problema y depositamos una gota de suspensión de hematíes que se corresponda con la letra rotulada en cada tubo y en el tubo C le añadimos suspensión de hematíes propio de la sangre problema y nos servirá de control. Agitamos los 6 tubos y lo centrifugamos a 1000 rpm durante 1 minuto. Por último observamos si hay aglutinación.

Hoja de trabajo.

1.¿ Qué son los hematíes tipados?

Hematíes de grupo sanguíneo conocido.

2.¿A qué dilución empleamos los hematíes del paciente ?

Al 5%

3.¿Qué clase de muestra se emplea en esta técnica?

Suero o plasma.

4.¿Qué ocurre cuando el tubo C presenta aglutinación?

Que el grupo eritrocitario es ininterpretable y presenta autoanticuerpos.

Resultado obtenido.

	Aglutinación	No aglutinación.
Tubo A1		No aglutina
Tubo A2		No aglutina
Tubo B	Si aglutina
Tubo 0		No aglutina
Tubo C		No aglutina

Valoración de los resultados.

• Los A encontrados en el suero son: anti-B
• El grupo eritrocitario de la sangre analizada es: A1

La primera vez que la hicimos no salio nada porque la concentración de suero fisiológico estaba mal hecho. Pero los resultados que he puesto me salieron al repetir cuando repetí la práctica.