DETERMINACIÓN DEL GRUPO Rh EN TUBO.
Fundamento.
El objetivo es la detección del antígeno D en la superficie de los hematíes enfrentándolo a un suero anti-D.
Materiales.
- Tubos de hemólisis.
- Rotulador de vidrio.
- Gradilla.
- Pipeta Pasteur.
- Centrífuga.
Reactivos.
- Suero anti-D.
- Albúmina bovina al 30%
- Solución salina fisiológica.
Muestra.
Suspensión de hematíes al 5%.
Para obtener la suspensión de hematíes lo primero que realizamos es el lavados de los hematíes.
Para ello depositamos 1 ml de sangre y lo completamos con 3 ml de solución salina, lo agitamos y lo centrifugamos a 2000 rpm durante 4 minutos. Después desechamos el sobrenadante y volvemos a realizar el paso anterior 2 veces más. En la última centrifugación que realizamos desechamos el sobrenadante y preparamos hematíes al 5%. En un tubo depositamos 5 gotas (250 microlitros) de los hematíes lavados y 5 ml de suero fisiológico lo agitamos y así obtenemos una suspensión al 5 %.
Procedimiento.
Primero rotulamos dos tubos, una con la letra D y otro con la letra A. El en tubo D le depositamos una gota de suero anti-Dy en el tubo A le depositamos una gota de albumina bovina al 30% y agitamos. A los dos tubos le depositamos una gota de la suspensión de hematíes al 5%3 y agitamos los tubos. Por último centrifugamos a 1000 rpm durante 1 minuto.
Hoja de trabajo.
1. ¿Por qué utilizamos el control de albúmina?
Porque si aparece aglutinación en ese tubo se debe repetir la prueba pero usando un suero anti-D en medio salino. El tubo con albúmina debe dar siempre negativo.
2.¿ Que ocurre si no aparece aglutinación en el tubo D ?
Si no produce aglutinación en ninguno de los dos tubos procedemos a incubar ambos a 37ºC durante media hora. Posteriormente centrifugamos a 1000 rpm durante un minuto y observamos si existe o no aglutinación. En el caso de persistir la negatividad comprobaremos que le paciente no posee un Du ( D débil) mediante una prueba de Cooms indirecta.
3. ¿Que debemos detectar mediante un Coombs indirecto ?
La presencia de un Du (D débil )
4. ¿Cómo se prepara la muestra problema?
Resultado obtenido.
Procedimiento.
Primero rotulamos dos tubos, una con la letra D y otro con la letra A. El en tubo D le depositamos una gota de suero anti-Dy en el tubo A le depositamos una gota de albumina bovina al 30% y agitamos. A los dos tubos le depositamos una gota de la suspensión de hematíes al 5%3 y agitamos los tubos. Por último centrifugamos a 1000 rpm durante 1 minuto.
Hoja de trabajo.
1. ¿Por qué utilizamos el control de albúmina?
Porque si aparece aglutinación en ese tubo se debe repetir la prueba pero usando un suero anti-D en medio salino. El tubo con albúmina debe dar siempre negativo.
2.¿ Que ocurre si no aparece aglutinación en el tubo D ?
Si no produce aglutinación en ninguno de los dos tubos procedemos a incubar ambos a 37ºC durante media hora. Posteriormente centrifugamos a 1000 rpm durante un minuto y observamos si existe o no aglutinación. En el caso de persistir la negatividad comprobaremos que le paciente no posee un Du ( D débil) mediante una prueba de Cooms indirecta.
3. ¿Que debemos detectar mediante un Coombs indirecto ?
La presencia de un Du (D débil )
4. ¿Cómo se prepara la muestra problema?
Para obtener la suspensión de hematíes lo primero que realizamos es el lavados de los hematíes.
Para ello depositamos 1 ml de sangre y lo completamos con 3 ml de solución salina, lo agitamos y lo centrifugamos a 2000 rpm durante 4 minutos. Después desechamos el sobrenadante y volvemos a realizar el paso anterior 2 veces más. En la última centrifugación que realizamos desechamos el sobrenadante y preparamos hematíes al 5%. En un tubo depositamos 5 gotas (250 microlitros) de los hematíes lavados y 5 ml de suero fisiológico lo agitamos y así obtenemos una suspensión al 5 %.
Aglutinación.
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Sección D
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Aglutinación
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Sección A
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No aglutina.
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Valoración de los resultados.
La sangre analizada es:
Rh positivo
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