Práctia LXIV: P4 (28/05/2015)

PRUEBA CRUZADA MAYOR.

Fundamento.

Esta práctica consiste en enfrentar suero del paciente con los  hematíes del donante ,para poder saber si son compatibles para una transfusión. Primero se realiza en un medio salino, después en un medio albuminosos y por último lo enfrentamos al suero de Coombs.

Materiales.

• Tubo de hemólisis.
• Centrífuga.
• Baño de agua.
• Pipetas Pasteur.
• Gradilla .
• Reloj.

Muestra.

• Plasma del receptor.
• Suspensión de hematíes del donante al 5%.

Para obtener la suspensión de hematíes lo primero que  realizamos es el lavados de los hematíes.

Para ello depositamos 1 ml de sangre y lo completamos con 3 ml de solución salina, lo agitamos y lo centrifugamos a 2000 rpm durante 4 minutos. Después desechamos el sobrenadante y volvemos a realizar el paso anterior 2 veces más. En la última centrifugación que realizamos desechamos el sobrenadante y preparamos hematíes al 5%. En un tubo depositamos 5 gotas (250 microlitros) de los hematíes lavados y 5 ml de suero fisiológico lo agitamos y así obtenemos una suspensión al 5 %.

Reactivos.

• Solución salina fisiológica.
• Albumina bovina al 30%
• Suero de Coombs.

Procedimiento.

1. Depositamos en un tubo de hemólisis una gota de suspensión de  hematíes del donante y dos gotas de plasma del receptor. Lo mezclamos y lo dejamos reposar durante 2 minutos.
2. Centrifugamos a 3000 rpm durante 1 minuto.
3. Leemos el resultado, es decir observamos si hay aglutinación en el caso de que se observemos un botón hemático no debemos seguir con la práctica ya que indica que son incompatibles.Pero si no observamos el botón hay que seguir. ( Cuando realice la práctica se observo el botón hemático por lo que no tuvimos que realizar los pasos siguientes )
4. Añadimos al tubo 3 gotas de albúmina, lo mezclamos y lo incubamos a 37ºC durante 30 minutos.
5. Centrifugamos a 3000 rpm durante 1 minutos y observamos si hay aglutinación, si no se observa el botón hemático debemos seguir la práctica.
6. Lavamos los hematíes con suero fisiológico tres veces.
7. En el último lavamos desechamos correctamente el sobrenadante y depositamos una gota de suero de Coombs y mezclamos bien.
8. Centrifugamos a 1000 rpm durante 2 minutos, y por último leemos los resultados.
9. Si se observa el botón hemático indica incompatibilidad y si no hay aglutinación en ninguno de los pasos indica que son compatibles.

Hoja de trabajo.

1. ¿Qué se enfrenta en la prueba cruzada mayor?

Se enfrenta el suero del receptor con los hematíes del donante.

2.¿ Cuándo se debe realizar la prueba cruzada menor?

Sólo se realiza cuando se transfunde una gran cantidad de plasma, ya que en este caso, la presencia de anticuerpos en la sangre del donante puede ser peligroso.

3. ¿Por qué debemos realizar la prueba en medio salino y albuminoso?

Para detectar todos los anticuerpos presentes.

4.¿ Qué pone de manifiesto el suero antiglobulina  de Coombs ?

Los anticuerpos que se hayan quedado fijados a la membrana eritrocitaria.

Resultado.

	Resultado.
Medio salino.	Se observa el botón hematico.
Medio albuminoso	No se ha realizado
Suero antiglobulina	No se ha realizado

Valoración de los resultados.

Las sangres analizadas son:

Incompatibles.