DETERMINACIÓN DE UN Du.
Fundamento.
Para poner de manifiesto al Du ( antígeno D débil ) debemos sensibilizar los hematíes problema con un suero que tiene anticuerpos anti-D y después enfrentarlo al suero de Coombs.
Debemos realizar una prueba de Coombs indirecta.
Material.
- Tubos de hemólisis.
- Centrífuga.
- Pipeta Pasteur.
- Gradilla
- Baño de agua.
- Reloj.
Reactivos.
- Suero anti-D humano.
- Suero antiglobulina humana de conejo ( suero de Coomb) .
- Solución salina fisiólogica.
Muestra.
Suspensión de hematíes al 5%.
Para obtener la suspensión de hematíes lo primero que realizamos es el lavados de los hematíes.
Para ello depositamos 1 ml de sangre y lo completamos con 3 ml de solución salina, lo agitamos y lo centrifugamos a 2000 rpm durante 4 minutos. Después desechamos el sobrenadante y volvemos a realizar el paso anterior 2 veces más. En la última centrifugación que realizamos desechamos el sobrenadante y preparamos hematíes al 5%. En un tubo depositamos 5 gotas (250 microlitros) de los hematíes lavados y 5 ml de suero fisiológico lo agitamos y así obtenemos una suspensión al 5 %.
Procedimiento.
En un tubo de hemólisis depositamos una gota de suero anti-D y un gota de suspensión de hematíes al 5%. Lo mezclamos suavemente y lo incubamos a 37ºC durante 30 minutos. Después de incubar lavamos los hematíes, para ellos completamos el tubo con 3 ml de suero fisiológico y lo centrifugamos a 1000 rpm durante 1 minutos, después desechamos el sobrenadante y volvemos a realizar el paso anterior 2 veces más. En la última centrifugación que realizamos desechamos completamente la solución salina y añadimos sobre el sedimento una gota de suero de Coombs y lo mezclamos. Por último centrifugamos el tubo a 1000 rpm durante 1 minuto.
Para evitar falsos positivos debemos realizar una prueba de Coombs directa de los hematíes problemas. Para ello realizamos los siguientes pasos:
Procedimiento.
En un tubo de hemólisis depositamos una gota de suero anti-D y un gota de suspensión de hematíes al 5%. Lo mezclamos suavemente y lo incubamos a 37ºC durante 30 minutos. Después de incubar lavamos los hematíes, para ellos completamos el tubo con 3 ml de suero fisiológico y lo centrifugamos a 1000 rpm durante 1 minutos, después desechamos el sobrenadante y volvemos a realizar el paso anterior 2 veces más. En la última centrifugación que realizamos desechamos completamente la solución salina y añadimos sobre el sedimento una gota de suero de Coombs y lo mezclamos. Por último centrifugamos el tubo a 1000 rpm durante 1 minuto.
Para evitar falsos positivos debemos realizar una prueba de Coombs directa de los hematíes problemas. Para ello realizamos los siguientes pasos:
- Depositar en un tubo de hemólisis 1 ml de suspensión de hematíes problema.
- Lavar los eritrocitos. Añadimos el tubo con suero fisiológico y lo centrifugamos a 1000rpm durante 1 minuto. Después desechamos el sobrenadante y volver a realizar el paso anterior 2 veces más. En el último lavado desechamos el sobrenadante.
- Resuspender el sedimento que queda después del ultimo lavado.
- Añadir 2 gotas de suero antiglobulina.
- Centrifugamos al mezcla a 3000 rpm durante 1 minuto.
- Observar si hay o no aglutinación.
Hoja de trabajo.
1. ¿Qué contiene el suero de Coombs?
Suero antiglobulina humana.
2. ¿Qué se detecta con la prueba directa ?
Intentamos detectar anticuerpos incompletos que han sensibilizado a los hematíes in vivo.
3. ¿Qué podemos detectar con la prueba indirecta?
Se busca anticuerpos incompletos libres en el suero, o poner de manifiesto la presencia de antígenos débiles en la membrana de los hematíes.
4.¿ Qué buscamos en la sangre del paciente?
La presencia del antígeno Du.
5.¿ Qué ocurre si el control es positivo?
Que es Rh positivo y para evitar falsos positivos se realiza la prueba de Coombs directa con los hematíes problema.
Resultado obtenido.
Aglutinación.
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Tubo 1
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Si aglutinación
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Valoración de los resultados.
La sangre es: Rh positivo
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