Práctica XL: P3 (6/03/2015).

PREPARACIÓN DE UNA CURVA DE ACTIVIDAD DE LA PROTROMBINA.

Fundamento.
Debemos realizar una bateria de diluciones, para obtener con el coagulometro el TP del plasma puro y de cada una de sus diluciones para realizar la curva.

Material.

• 8 tubos de ensayo de plástico.
• Rotulador de vidrio.
• Una pipeta graduada de vidrio de 1 ml.
• Una micripipeta de 100 y 200 microlitros.
• 7 puntas de micropipeta.
• 5 cubetas de coagulómetro.
• 5 trocitos de acero especiales para depositar en el interior de las cubetas.
• Un coagulómetro.
• Una gradilla.

Reactivos.

• Solución salina al 90 %.
• Una tromboplastina cálcica.
• Un pool de plasma normales.

Procedimiento.

Lo primero que hicimos en el pool de plasma, tomamos plasma congelado de otros años los atemperamos a 37º y los añadimos todos en un vaso de precipitados, y por último lo añadimos en los tubos de spenderfor.

Después tomamos 5 tubos de ensayo de plástico y los rotulamos con el porcentaje de actividad asignado a cada dilución que serían un tubo rotulado con 100 , otro con el de  50, otro con el de  33, otro con  25 y el último con el de 10.

Al tubo rotulado con % de actividad 100 le añadimos con una micropipeta 200 microlitros de pool de plasma ; al tubo 50 le añadimos 200 microlitros de pool de plasma y 200 microlitros de solución salina al 0,85 % ;al tubo 33 le añadimos 200 microlitros de pool de plasma y 400 microlitros de solución salina al 0,85%; al tubo 25 le añadimos 200 microlitros de pool de plasma y 600 microlitros de solución salina al 0,85% ; al tubo 10 le añadimos 200 micrilitros de pool de plasma y con una pipeta graduada de vidrio le añadimos 1,8 ml de solución salina al 0,85%.

Cuando ya tenemos los 5 tubos con pool de plasma y solución salina, con una micropipeta vertemos 100 microlitros de plasma puro y de cada una de sus diluciones en las cubetas rotuladas con el %de actividad que le corresponde. A cada una de las 5 cubetas le añadimos un trocito de acero.

Estas cinco cubetas las colocamos en la celdas que hay en el coagulómetro y en otra cubeta añadimos tromboplastina cálcica. En el coagulómetro le tenemos que añadir a cada cunbeta 200 microlitros de tromboplastina calcica.

Hoja de trabajo.

1º. ¿Con qué se diluye el pool de plasmas normales o el plasma control normal?

Con solución salina al 0,85 %

2º. ¿Qué porcentaje de actividad se asigna a la dilución del plasma control de 1/2?

 50 % de actividad.

3º. ¿ Cuándo se pone en marcha la lectura del coagulómetro?

Añadiendo a las diluciones 200 microlitros de tromboplastina cálcica.

4º. ¿Qué se anota en el eje de ordenadas?

Los valores en segundos del TP del plasma control no diluido y de cada una de sus diluciones.

Resultado obtenido.

	Tiempo de Protrombina (PT)
Plasma control no diluido (de 100% de actividad)	12 segundos
Plasma control diluido a 1/2 (de 50% de actividad)	19 segundos.
Plasma control diluido a 1/3 (de 33% de actividad)	25,3 segundos.
Plasma control diluido a 1/4 (de 25% de actividad)	32,4 segundos.
Plasma control diluido a 1/10 (de 10% de actividad)	65,1 segundos.