Práctica XXV: P3 (27/02/2015)

PRUEBA SE LA SACAROSA.

Fundamento.
Esta prueba consiste en situar los hematíes en un medio de baja fuerza ionica en este caso solución sacarosa. Así los hematíes fijan los complementos y los hematíes presentes en la muestras que tienen una sensibilidad mas alta que el complemento se lisan.

Materiales.

1. Pipeta Pasteur.
2. Pipeta graduada ( una de 5 ml, dos de 2 ml y 3 de 0,5ml)
3. Micropipeta de 100 microlitro.
4. Puntas de micropipeta.
5. 6 tubos de centrifuga.
6. Un reloj.
7. Una centrifuga.
8. Un espectrofotómetro.
9. Cubetas de espectrofotómetro.
10. Rotulados de vidrio.
11. Una gradilla.

Reactivos.

1. Solución acuosa de sacarosa.
2. Sangre de la bolsa de sangre.
3. Suero fisiológico.

Muestra.

 Sangre venosa.

Procedimiento.

Primero debemos tomar tres tubos de centrifuga y los debemos rotular. Tenemos que usar las siglas SF de suero fisiológico  en el primer tubo ,otro tubo con la sigla SC de sangre control y el último tubo con al sigla SP de sangre problema.

Debemos rellenar estos tres tubos con :

1. Al primer tubo que seria el de suero fisiológico (SF) le añadimos con ayuda de una pipeta graduada 1,8 ml de suero fisiológico y con una micropipeta 0.2 ml de sangre problema.
2. Al tubo de sangre control (SC) le añadimos con una pipeta graduada 1,8 ml de solución sacarosa y con ayuda de una micropipeta 0,2 ml de sangre control.
3. Al tubo de sangre problema (SP) le añadimos con una pipeta graduada 1,8ml de solución de sacarosa y con una micropipeta 0,2 ml de sangre problema.

	Tubo SF	Tubo SC	Tubo SP
Suero fisiológico (en ml)	1,8
Solución sacarosa (en ml)		1,8	1,8
Sangre control (en ml)		0,2
Sangre problema (en ml)	0,2		0,2

Una vez que hayamos llenado los tubos los agitamos suavemente. Dejamos los tubos en reposo durante 30 minutos y por último lo centrifugamos durante 5 minutos a 2000rpm.
En el espectrofotómetro.

1. Primero tomar 3 tubos ( uno TB ( tubo blanco), TPr ( tubo problema), TPA (tubi patrón))
2. En el tubo TB se le añade 5 ml de solución acuosa de amoniaco y 0,3 ml de suero fisiológico.
3. En el tubo TPr se le añade 5 ml de solución acuosa de amoniaco y 0,3 del sobrenadante del tubo SP.
4. En el tubo TP se le añade 5 ml de solución acuosa de amoniaco y 0,2 de la mezla del tubo SF.
5. Pasar estas diluciones a tres cubetas.
6. Por último llevar al espectrofotómetro y obtener su absorbancia.

Resultado.

 % de hemólisis= (A/Am)x100
% de hemólisis =(0,007/0,438)x100 =1,60 % de hemólisis.

Am= 0,007
Ap= 0,438

A= Absorbancia del líquido presente en el tubo problema.

Am= Absorbancia del líquido contenido en el tubo patrón ( A máximo)

Hoja de trabajo.

1º. ¿Con qué solución se hemolizan los hematíes vertidos en el tubo problema?

Cloruro cálcico.

2º. ¿ A qué concentración se prepara la solución de sacarosa?

A una concentración del 9,24%

3º. ¿ Como se llama también la sacarosa?

Azúcar común.

4º. ¿ Qué es el ACD?

Ácido  cítrico - dextrosa.

5º. ¿ Cómo se prepara el tubo blanco?

El tubo blanco se prepara vertiendo 5 ml de solución aminiaco y 0,3ml de suero fisiológico.

6º. ¿Qué porcentaje de hemólisis suele producirse, con la prueba de la sacarosa, en la sangre de la HPN?

 Entre el 10 y 80 % de hemólisis.

Resultado obtenido.

Lectura espectrofotométrica.

Tubo	A	% de hemólisis
Patrón.	0,438	100 %
Problema.	0,007	1,60 %

Valoración de los resultados.

• Los hematíes problema: No tiene una sensibilidad aumentada al completo.
• El enfermo: no padece una HPN.