domingo, 25 de enero de 2015

Práctica XXXIII : P1 (12/01/2015)

DETECCIÓN DE CRIOGLOBULINAS.
Fundamento.
La detección de rioglobulinas se basa en exponer suero a temperatura baja.
En el caso de que el suero tenga crioglobulinas con el frío este precipita  que toman un aspecto de partículas blanquecidas.
Material.
  • Pipeta pasteur.
  • Tubo de ensayo.
  • Una gradilla.
  • Una nevera.
  • Baño de agua.
  • Un capilar mi microhematocrito no hepariizado.
  • Plastilina.
  • centrífuga.
  • Una regla o un lector de microhematocrito.

Muestra.
La muestra que necesitamos para esta práctica es suero que lo vamos a obtener  de sangre coagulada a temperatura corporal.
Debemos evitar que la coagulación se forme en un ambiente frío.
Procedimiento.
Una vez que tengamos el suero lo tenemos que depositar en un tubo de ensayo. El tubo con el suero lo colocaremos en la nevera a una temperatura comprendida entre los y 6 º C. Lo dejamos durante 30 minutos y los examinamos esto se debería hacer durante 6 días pero en nuestro caso no lo hemos hecho durante ese tiempo solo lo examinamos al pasar la media hora.

Resultado.
En el caso de que aparezcan partículas blanquecidas tendrá que ser incubado a 37 º C.
Después de incubarlos, si estas partículas no deparecen es señal se que se trata de restos de fibrina pero en el caso de que desaparezcan quiere decir que se trata de crioglobulinas precipitadas que seria que la prueba es positiva.
Grado de positividad :

ASPECTO DEL SUERO.
GRADO DE POSITIVIDAD.
Discretamente turbio.
+
Francamente turbio.
++
Lechoso.
+++

En el caso de que la pruebe sea positiva se puede medir la semicuantificación de las crioglobulinas mediante la siguiente manera.
Tenemos las 3/4 partes de longitud del tubo capilar con el suero; el extremo por donde se ha introducido el suero lo tenemos que tapar con plastilina. Este capilar lo dejamos enfriar a 4-6ºC y después lo centrifugamos a 12000g durante cinco minutos. Por último se debe calcular el porcentaje de la columna formada por el precipitado con respecto al total del suero.
 Resultado.
El resultado es negativo no tiene crioglobulina.

Hoja de trabajo.
1º ¿ A qué temperatura se debe someter el suero en una detección de crioglobulinas?
Se debe someter a unos 4-6ºC

2º Si el precipitado no se reabsorbe con calor, ¿ de qué sustancia está formado?
De restos de fibrina.

3º ¿ Cuántas cruces se le asigna a un suero que adquiere un aspecto lechoso?
Tres cruces.

4º ¿ A qué concentración sérica suelen encontrarse las crioglobulinas tipo I?
Se encuentra en el suero a una alta concentración (> 5 mg/ml )

5º¿ Qué manifestaciones clínicas puede producir una crioglobulinemia?
Aumento de la viscosidad de la sangre.
Precipitación de las crioglobulinas.
Depósito de inmunoomplejos.

Resultados obtenidos.
¿ Se redisuelve el precipitado con calor ?
Si.
Valoración de los resultados.
En el suero problema:
No hay crioglobulinas.

Práctica XIII:P2 (25/11/2014)

RECUENTO DE HEMATÍES.
Fundamento.
Para el recuento de hematíes lo que se debe de hacer el diluir la sangre en el líquido de dilución mediante una pipeta de Thoma. Finalmente esto se extendiendo en una cámara de recuento.

Material.
  1. Una pipeta de Thoma para glóbulos rojos.
  2. Un tubo de goma con boquilla.
  3. Una cámara de recuento.
  4. Un cubre.
  5. Un microscopio.
  6. Papel de filtro
  7. Tubo de ensayo.
  8. Gradilla.
Reactivos.
Líquido de dilución. El que vamos a utilizar, que es el más utilizado, es el de Hayem.
El líquido de Hayem se compone de:
  • 2,5 g de sulfato sódico.
  • 0,5 g de cloruro sódico.
  • 0,25 g de cloruro mercurio.
  • 100 ml de agua  destilada.
Para la limpieza de la pipeta de Thoma necesitaremos.
  • Agua corriente.
  • Agua destilada.
  • Alcohol.
Muestra.
Sangre venosa.

Procedimiento.
Lo primero que debemos de hacer es tener en un tubo sangre venosa y en otro tubo de ensayo el líquido de dilución. Con la pipeta de Thoma vamos a aspirar sangre venosa hasta la señal de 1, limpiaremos la parte exterior de la pipeta con una gasa teniendo en cuenta que no tocamos la punta de la pipeta y después aspiramos el líquido de dilución hasta la señal de 101. Una vez realizado este paso cogemos con los dedos pulgar e índice la pipeta de Thoma ,previamente desganchamos el tubo de goma, y la agitamos suavemente durante unos minutos. En un tubo desechamos las tres primeras gotas que corresponde con el líquido que no esta mezclado con sangre. 
En la cámara de recuento debemos colocar un cubre, esto lo hacemos mojando un dedo y con el dedo humedo lo pasamos por las bandas laterales, y colocamos el cubre entre esas bandas. Cuando tengamos la cámara con el cubre, colocamos la pipeta de Thoma en posicion casi vertical en el borde apropiado es decir en el centro de la cámara y dejamos caer una gota entre el cubre y la cámara lo mismo debemos de hacer para el borde que se encuentra enfrente. Como se observa en la siguiente imagen.




Lo dejamos reposar durante unos minutos y lo colocamos en la platina para observarlo con el objetivo de 40x y el condensador a baja altura. Debemos de contar lo hematíes presentes el 5 cuadrados, es decir en los cuatro cuadrados que se encuentran en los entremos superiores e inferiores y en cuadro que se encuentran en el centro.
Para evitar contar los mismo hematíes solo se contaran los que están contenidos dentro del cuadrado y los que están en contacto con las líneas de demarcación superior y derecha; y los cuadrados se cuentan siguiendo un orden en Zig Zag.

Resultado.



RBC= HX5X10XD


  • RBC= Recuento de hematíes ( número de hematíes por mm3 de sangre)
  • H = hematíes contados en 5 cuadrados medianos.
  • :D= factor de dilución (100)
Total:117 hematíes.
Cuadrado del extremo superior de la izquierda.

 6

 6

 12

 7

 7

 6

 11

 5

 7

 13

 2

 3

 8

 7

 11

 6

Total=127 hematíes.
Cuadrado del extremo superior de la derecha.

 6

 10

 8

 8

 8

 13

 11

 5

 6

 8

 16

 5

 6

 5

 8

 4
Total=158 hematíes.
Cuadrado central.

 7

 12

 17

 13

 12

 9

 6

 14

 8

 11

 7

 5

 5

 12

 9

 11
Total=191 hematíes.
Cuadrado del extremo inferior de la izquierda.

 9

 8

 10

 4

 10

 13

 16

 12

 12

 19

 14

 13

 9

 8

 14

 20
Total=170 hematíes.
Cuadrado del extremo inferior de la derecha.

 10

 9

 4

 12

  10

 12

 14

 16

 10

 12

 11

 12

 14

 8

 5

 11

RBC=3815000 hematíes/ mm3
H= 117+127+158+191+170=763 hematíes.
D=100

RBC= 763x5x10x100  = 3815000 hematíes/mm3

Hoja de trabajo.
1º ¿ Qué se debe hacer si el líquido de Hayem contiene precipitados?
Si contiene precipitados, antes de usarlo deberá ser filtrado.

2º ¿ Cuál es el volumen de sangre diluido que hay sobre cada uno de los cuadrados pequeños donde se han contado los hematíes?
0,00025 mm3 de sangre.

3º¿ Cuál es el volumen de sangre diluida que hay sobre cada uno de los cuadrados medianos donde se han contado los hematíes?
0,004 mm3 de sangre.

4º¿ Cuál es el volumen de sangre diluida que hay sobre el cuadrado central ?
0,1 mm3 de sangre.

5º Si la pipeta Thoma se enrasa con sangre hasta la señal de 1 ¿ cuál es la dilución posteriormente obtenida?
Una dilución de 1/100.

6º Si la sangre se diluye a 1/200 y se cuentan 450 hematíes en 5 cuadrados medianos , ¿ cuál es el RBC obtenido ?

RBC= Hx5x10xD

H= 450 hematíes.
D=200
RBC= 450x5x10x200 =4500000 hematíes/mm3

Resultado obtenido.
Hematíes contados en 5 cuadrados medianos= 763 hematíes.
Factor de dilución = 1/100
RBC= 3815000 hemtíes /mm3

Valoración de los resultados.
Sexo de la persona a la que pertenece la sangre= masculino.
El RBC obtenido es : Bajo.

jueves, 15 de enero de 2015

Práctica XXXV :P2 (15/01/2015)

RECUENTO DE PLAQUETAS CON HEMOCITÓMETRO.
Fundamento.
En esta practica vamos a liduir la sangre en un liquido apropiado y lo depositaremos en una cámara de recuento.
Materiales.
  • Tubo de ensayo.
  • Pipeta diluidora de Thoma, para recuento de glóbulos rojos.
  • Tubo de goma.
  • Gasa
  • Cámara de recuento.
  • Cubre
  • Microcopio.
  • Placa petri 
  • papel de filtro.
Reactivos.
  • Agua destilada.
  • Liquido de dilución suministrado por los Laboratorios Spinreact.

Muestra.
Sangre venosa.

Procedimiento.
Vertemos el liquido de dilución en un tubo de ensayo, con la pipeta de thoma aspiramos la sangre gasta la señal de 1 y limpiamos con una gasa el exterior , después aspiramos el líquido de dilución hasta la señal de 101 de la pipeta. Agitamos el tubo tomandolo con el pulgal y el indice durante 5 minutos,desechamos las 5 primeras gotas. Después tenemos que colocar un cubre en la cámara y cargar correctamente la cámara de recuento . La cámara la colocamos en el interior de placa petri en cuyo interior se deposita un papel de filtro embebido con agua, se deja durante 15 minutos. Por último la observamos en el microscopio con el objetivo de 40x.

Resultado.
PLT/mm3=Px1000

P=535x1000 = 535000 plaquetas por mm3.


Hoja de trabajo.
1º. ¿Qué tipo de pipeta diluidora se utiliza en el recuento de plaquetas?
Una pipeta diluidora de Thoma,para recuento de glóbulos rojos.

2º. ¿Qué funciones desempeña el líquido de dilución empleado?
Este líquido rompe los hematíes, evita la agregación de las plaquetas entre sí y su adhesión a otros elementos, y facilita la visualización de las plaquetas al hacerlas refrigentes.

3º. ¿Cuánto líquido de dilución se necesita para efectuar un ensayo ?
1 ml

4º. ¿Con qué se puede preparar una cámara húmeda?
Se puede preparar una cámara húmeda con una placa petri cerrada en cuyo interior se deposita un papel de filtro embebido en agua.

5º.¿Con qué objetivo se cuentan las plaquetas ?
Con el objetivo de 40x.

6º. ¿Cómo se aprecian los trombocitos en este recuento?
Se observan como corpúsculos redondeados u ovalados de tamaño muy pequeño y muy refringentes.



Valoración de los resultados.
El número de plaquetas obtenida es:
Normal.


Recuento de plaquetas utilizando micropipeta.

Procedimiento.

  1. Con una micropipeta tomamos 5 microlitros de sangre y los añadimos en un tubo de ensayo.
  2. Después tomamos 495 microlitros  de diluyente.
  3. Lo mezclamos y con una micropipeta tomamos 50 microlitros de esta dilución y cargamos la cámara de recuento.
  4. Observamos con el microscopio con el objetivo de 40x.

lunes, 12 de enero de 2015

Práctica XXVII :P2 (12/01/2015)

RECUENTO DE LEUCOCITOS ( WBC).

Fundamento.
 El recuento de leucocitos consiste en contar el número de leucocitos presentes en 1 mm3 de sangre.

Materiales.
  • Una pipeta diluidora de Thoma, para recuento de glóbulos blancos.
  • Un tubo de goma con boquilla, adaptable a la pipeta diluidora.
  • Una cámara de recuento.
  • Un cubre.
  • Un microscopio
  • Gradilla.
Reactivos.
El líquido es el de Turck, compuesto por: 
  • 2 ml de ácido acético glacial.
  • 1 ml de solución acuosa de violeta de genciana al 1%
  • 100 ml de agua destilada.
Muestra.
 Sangre venosa anticoagulada.

Procedimiento.
Lo primero que debemos de hacer es aspirar con la pipeta de thoma la sangre hasta la marca 1 , una vez tomada la sangre limpiamos el exterior de la pipeta con una gasa. Después aspirar el diluyente hasta la señal de 101. Una vez realizado este paso lo que hacemos es tapar los dos extremos con los dedos pulgar e índice, y lo agitamos suavemente durante 3 minutos. Pasado este tiempo en un tubo de ensayo desechamos las tres primera gotas ya que corresponde con el líquido que no esta mezclado con la sangre. Por otro lado tenemos que poner el cubre en la cámara de recuento para ellos mojamos un dedo y después con el dedo húmedo lo pasamos por los extremos de la cámara y situamos el cubre en el centro. Cuando ya tenemos la cámara con el cubre situamos la pipeta en el centro  del espacio existente entre ambas estructuras de la cámara haciendo que salga una gota que llene la zona que se encuentra entre el cubre y la cámara ,lo mismo hacemos para el espacio que se encuentra enfrente.
Por último tenemos que contar los leucocitos presentes en los 4 cuadros de los extremos y a su vez cada uno de ellos está dividido en 16 cuadrados medianos.
Los leucocitos se pueden contar con el objetivo de 10x.


Resultado.

Total= 53 leucocitos.

Cuadro superior del extremo  de la izquierda.

       
      2

      5

      2

    2

      1

     1

      5

     2

      2

    2

     7

     2

      1

    9

      6

     4

Total=54 leucocitos.

Cuadro superior del extremo de la derecha.

   
      2

      5

      2

    2

      4

     5

      3

     5

      4

    3

     2

     3

      4

    4

      3

     3

Total= 58 leucocitos

Cuadro inferior del extremo  de la izquierda.

       
      6

      3

      2

    3

      3

     1

      3

     4

      6

    5

     7

     1

      1

    6

      4

     3

Total=51leucocitos.

Cuadro inferior  del extremo de la derecha.

       
      4

      0

      5

    1

      1

     4

      3

     4

      3

    1

     4

     5

      6

    2

      6

     2

Total de los cuatro cuadros de los extremos = 53+54+58+51= 216 leucocitos.



 WBC=(L/4)x10xD
  • WBC= recuento de leucocitos( número de leucocitos por mm3 de sangre)
  • L= leucocitos contados en 4 cuadros grandes.
  • D= factor de dilución (10)
L=216 leucocitos.
D=10

WBC=(216/4) x 10 x 10 =5400 leucocitos / mm3 de sangre

Hoja de trabajo.
1º ¿ Cuál es el líquido de dilución utilizado en el WBC?
 El líquido de dilución más utilizado es el de Turck, que se compone de las siguientes sustancias:
  • 2 ml de ácido acético glacial.
  • 1 ml de solución acuosa de violeta de genciana al 1%
  • 100ml de agua destilada.
2º¿ Para qué sirve el violeta de genciana que contiene el líquido de dilución?
 El violeta de genciana tiñe el núcleo de los leucocitos para que éstos puedan observarse mejor.

3º¿ Con qué objetivo se pueden contar los leucocitos?
Con el objetivo de 10x.

4º Si la sangre se diluye a 1/10 y se cuentan 100 leucocitos en 2 cuadrados grandes periféricos,¿ cuál es el WBC obtenido?
WBC=(100/2)x10x10=5000 leucocitos/mm3 de sangre.

Resultado obtenido.
Leucocitos contados en los 4 cuadrados grandes periféricos:  216 leucocitos.
Factor de dilución: 1/10
WBC: 5400 leucocitos/mm3 de sangre.

Valoración de los resultados.
El WBC obtenido es:
Normal.