Práctica XLI :P3 (9/03/2015).

DETERMINACIÓN FUNCIONAL DE FIBRINÓGENO.

Fundamento.
El fibrinógeno se transforma en fibrina en presencia de exceso de trombina. El tiempo de formación del coagulo en esta practica es inversamente proporcional a la concentración de fibrinógeno presente ne la muestra del plasma. En presencia de altas concentración de trombina el tiempo de formación del coágulo en el plasma es inversamente proporcional a la concentración de fibrinógeno.

Materiales.

1. Pipeta graduada.
2. Micropipeta.
3. Cubetas de coagulometro.
4. Coagulometro.
5. Gradilla.

Reactivos.

• R1 : Trombina Bovina.

• R2: Tampón imidazol.

• R3: Solución caolín.

• Coagulation Cal.

Muestra.

Plasma pobre en plaquetas.

Procedimiento.

• Dilución 1/10 con la muestra (PPP) y R2 ( tampón imidazol) .Sería 50 microlitros de muestra más 450 microlitros de R2.
• Tomamos 5 tubos y lo rotulamos según su concentración, que sería 1/40, 1/30.1/20,1/10,1/5.

En el tubo 1/40 se le añade 3,9 ml de R2 y 100  microlitros de coagulation.

En el tubo 1/30 se le añade 2,9 ml de R2 y 100 microlitros de coagulation.

En el tubo 1/20 se le añade 1,9 ml de R2 y 100 microlitros de coagulation.

En el tubo 1/10 se le añade 0,9 ml de R2 y 100 microlitros de coagulation.

En el tubo 1/5 se le añade 0,4 ml de R2 y 100 microlitros de coagulation.

•  Añadimos  200 microlitros de cada dilución en cubetas de coagulometro y se le añade 20 microlitros de R3 y lo atemperamos a 37º durante 4 minutos.
• Añadimos 100 microlitros de reactivo R1 y cronometrar la formación del coágulo.

Hoja de trabajo.

1º. ¿ De qué tipo es la determinación de fibrinógeno realizada en esta práctica?

Esta práctica se basa en la medición del tiempo que tarda un exceso de trombina en degradar a fibrina el fibrinógeno presente en un PPP diluido y, por tanto, en formar un coagulo.

2º. ¿A qué concentración está la trombina bovina?

A una concentración de 100 U NIH/ml.

3º. ¿A qué dilución se somete a la muestra?

A 1/10

4.º¿Cuál es la fibrinogenemia normal?
La fibrinogenemia normal oscila entre los 150 y los 450 mg/dl.

Resultados obtenidos.

Curva del fibrinogeno.

Dilución del plasma calibrador.	Concentración.	Tiempo en el que coagula.
1/40	0,25*xC	48,5
1/30	0,33*xC	37,4
1/20	0,5*xC	9,4
1/10	1*xC	142,7
1/5	2*xC	7

Tiempos obtenido en el coagulómetro.

Tiempo, en segundos, en el que coagula la muestra:

10 segundos.

Valoración de los resultados.

La fibrinogenemia es:
Normal.

Práctica XLV : P3. (10/3/20154)

PRUEBA DE MEZCLA CON PLASMA NORMAL.

Fundamento.

En esta práctica vamos a mezclar en cantidades iguales de pool de plasma y plasma pobre en plaquetas anormal, para determinar el tiempo de protrombina.

Materiales.

1. Gradilla,
2. Cubeta de coagulometro.
3. Trocitos de acero.
4. Un rotulador de vidrio.
5. Una coagulometro.
6. Un micropipeta de de 100 microlitros.
7. Una baño de agua.
8. Tubo de ensayo de plástico.

Reactivos.

• Solución de cloruro calcico 0,025 M
• Una cefalina activa con ácido elagico.
• Pool de plasma normales.

Muestra.

Plasma pobre en plaquetas.

Procedimiento.

1. Lo primero que hay que hacer es mezclar 100 microlitros de pool de plasma con 100 microlitros de plasma pobre en plaquetas anormal.

PPP anómalo.	100 uL
Pool de plasma normales o Plasma control normal.	100 uL
Dilución.	1/2

1. Lo incubamos en el baño de agua a 37ºC durante 60 minutos.
2. Tomamos 200 microlitros de cloruro calcico añadimos en un tubo de plastico y lo incubamos en el baño durante 5 minutos a 37 ºC.
3. Tomamos dos cubetas de coagulometro, le introducimos en trozo de acero y lo rotulamos como M1 y M2.
4. A las cubetas M1 Y M2 le añadimos 100 microlitros de la dilución anterior ( 100 microlitros de PPP anormal y 100 microlitros de pool de plasma) y también le añado 100 microlitros de cefalina.
5. En el coagulometro lo ponemos en la celda adecuada y le ponemos encima en tapón rojo y se le añade 100 microlitros de cloruro calcico después le pulso Reser y empieza a contar el tiempo que tarda en coagula; el mismo proceso se realiza para la cubeta M2.

Resultado.

M1: 60segundos.
M2:68 segundos.

Hoja de trabajo.

1.º ¿Cuándo debe hacerse una prueba de mezcla con plasma normal?

Se practica generalmente cuando en el plasma problema se determina un TP normal y un TTPA alargado. En estas circunstancias se supone que el paciente sufre un déficit de algún factor de la vía intrínseca y, en concreto , de los factores VII, IX,XI o XII.

2.º Si tras la mezcla con plasma normal, no se corrige el TTPA, ¿ qué se debe investigar?

Si el TTPA de la mezcla no se corrige con respecto al del PPP problema puro, el trastorno coagulatorio se debe a otros motivos como, por ejemplo , a la actuación de sustancias inhibidoras de la coagulación.

Resultados obtenidos.

Tras la mezcla del plasma problema anómalo con plasma normal:
Se ha corregido el TTPA.

Valoración de los resultados.

La prueba realizada indica:

La ausencia de algún factor de la vía intrínseca de la coagulación en el plasma anómalo.

Pruebas que investigan la coagulación. (2 /03/2015)

Tiempo de coagulación.

Fundamento.

Determinar el tiempo que tarda en coagularse la sangre en un capilar.

Materiales.

• Capilar sin heparina.
• Baño de agua.
• Lanceta.
• Algodón.

Reactivo.

Alcohol.

Muestra.

Sangre venosa sin anticoagulante.

Procedimiento.

1. Se sitúa la muestra dentro de un tubo de vidrio.
2. Se incuba a 37º C.
3. Se cuenta el tiempo trascurrido desde el deposito de la sangre en el tubo hasta la aparicion de un coagulo en el interior del tubo.
4. Los valores normales se sitúan entre los 5- 10 minutos.

Resultado.

Se tardo 3 minutos.

Esta prueba ya esta en desuso.

Práctica XXVI:P3 (2/03/2015)

DETERMINACIÓN DE LA VELOCIDAD DE SEDIMENTACIÓN GLOBULAR (VSG)

Fundamento.

La sangre se coloca en un tubo que esta dispuesto verticalmente, de este modo la sangre por acción de la gravedad se desplaza hacia el fondo del tubo. Este proceso normalmente es lento porque la acción con la que es atraído los hematíes es casi compensada por la fuerza ascendente creada por el plasma al desplazarse hacia arriba.

Materiales.

1. Pipeta de vidrio desechable que agrega en su interior una embolo de aspiración de plástico.
2. Una gradilla
3. Un tubo con citrato sódico con tapón de goma perforable.
4. Reloj.

Reactivos.

Citrato sódico 3,8 %

Muestra.

Sangre fresca.

Procedimiento.

Lo primero que debemos de hacer es llenar el tubo con citrato sódico con sangre fresca, después lo mezclamos agitando suavemente y por boca del tubo le introducimos la pipeta desechable que se debe llenar con la sangre hasta el algodón. Realizar la lectura a la primera hora y ala segunda hora.

Resultado.

• Sexo del paciente : Varón.

Primera hora = 5 mm

Segunda hora=10 mm

Valoración de los resultados.

Teniendo en cuenta el sexo del paciente, la VSG obtenida es:

Normal.

Hoja de trabajo.

1.º ¿Cómo se llama la carga electrostática negativa de los glóbulos rojos?

Potencia Z.

2.º ¿Qué anticoagulante es el más apropiado para realizar una determinación de la VSG?

Citrato sodico al 3,8 %

3.º ¿ A que temperatura se recomienda practicar la determinación de la VSG ?

A temperatura ambiente a unos 27º

4º. ¿Qué ocurre si la pipeta de VSG esta inclinada durante la determinación?

Que no bajara al mismo ritmo que si lo esta verticalmente bien.

5º. ¿En que circunstancia fisiologica aumenta la VSG?

En presencia de patología aumenta en la vejez y a partir del tercer mes de embarazo.

6º. ¿A que tiempos se efectúa la lectura del VSG?

A la primera y segundo hora.

Práctica XXXIX :P3 (4/03/2015) .

DETERMINACIÓN DEL TIEMPO DE TROMBOPLASTINA PARCIAL ACTIVADA (TTPA)

Fundamento.
Esta práctica se realiza introduciendo en un tubo PPP (plasma pobre plaquetas) y añadiendo cloruro cálcico utilizando el coagulómetro.
El sustituto del factor 3 plaquetario es un dilución fosfolipida creada con cerebros de conejo llama cefalina.

Material.

• Una gradilla.
• 2 cubetas.
• 2 trocitos de acero.
• Un rotulador.
• Micropipeta de 100 microlitros.
• 7 puntas de micropipeta.
• Un coagulómetro.
• 4 tubos de ensayo de plástico.

Reactivos.

• Cloruro cálcico.
• Cefalina activada.
• Pool de plasmas normales.

Muestra.

Un plasma pobre en plaquetas (PPP).

Procedimiento.

Lo primero que hacemos en centrifugar la sangre a 3000 rpm durante 10 minuto para obtener plasma pobre en plaquetas. Rotular dos cubetas, uno con la letra M ( de muestra) y otro con la letra C ( de control). Añadimos con una micropipeta 100 microlitros de muestra al tubo M y 100 microlitros de plasma control normal en el tubo C; también se le añade 100 microlitros de cefalina. En las dos cubetas le introducimos un trocito de acero y lo dejamos alentar en las celdas del coagulómetro 2 minutos. Por último en el coagulometro, se coloca la cubeta en la celda adecuada y se le añade 100 microlitros de cloruro cálcico para que el magnetoagitador se ponga en marcha y comience la lectura.

Hoja de trabajo.
1º. ¿De dónde se obtiene el sustituto de f3p?
De una suspensión de fosfolípidos, obtenida a partir de cerebros de conejo, que recibe el nombre de cefalina.

2º.¿Cómo se llama el sustituto del f3p?
Se llama cefalina.

3º.¿Qué activadores de los fatores de contacto se pueden utilizar?
Como activadores de los factores de contacto se pueden utilizar varias sustancias, entre las que cabe destacar : el caolín, el polvo de vidrio, el sílice, el celite y el ácido elágico.

4º. ¿Cuántos segundos debe superar el TTPA de la muestra al del control para ser considerado anormal?
Se considera anormal un TTPA de la muestra superior, en más de 8 segundos, al del control.

Resultado obtenido.
TTPA de la muestra:
116,6 segundos.

TTPA del control.
28,1 segundos.

Diferencia entre el TTPA de la muestra y el TTPA del control :
116-28,1 = 88,5 segundos.
Cociente entre el TTPA de la muestra y el TTPA del control:
116,6/28,1 =4,4 segundos.

Valoración de los resultados.
La muestra ensayada tiene un TTPA:
Alargado.

Práctica XXXVI:P3 (5/03/2015)

PRUEBA DE RUMPEL-LEEDE.

Fundamento.
Esta práctica ofrece información sobre la fragilidad capilar.

Material.

• Un rotulador.
• Un esfigmomanómetro,
• Un fonendoscopio.
• Un reloj.

Procedimiento.

1. Lo primero que hay que hacer es medir la presión arterial.
2. Trazamos un circulo de unos 5 cm de diámetro en la cara anterior del antebrazo.
3. Colocar el esfigmomanómetro en el brazo donde se ha pintado el circulo.
4. Insuflar aire del maguito del  esfigmomanómetro hasta ejercer una presión equivalente a la presión arterial media de la persona que esta realizando la prueba.
5. Mantenerlo durante 5 minutos.
6. Aflojar y retirar el esfigmomanómetro.
7. Contar la petequias que hayan aparecido en el interior del cirulo.

Forma de tomar la presión.

Resultado.

Resultado de la presión arterial es de:

Presión sistólica : 10

Presión diastolica: 6

La media es 8.

No se ha observado ninguna petequia.

Hoja de trabajo.

1º, ¿Cuánto tiempo se deja puesto el esfigmomanómetro en esta prueba ?

Durante 5 minutos.

2º. ¿Cómo se aprecian las petequias?

Como pequeñas manchas cutáneas de color rojizo.

3º. ¿Cuántas petequias debe contener el círculo para que el resultado sea claramente positivo?

Si hay mas de 20 de petequias.

4º. ¿En qué enfermedades hay una prueba de Rumpel-Leede positiva ?

En las trombocitopenias, en la enfermedad de von Willebrand, en el escorbuto y, sobre todo, en las púrpuras vasculares.

Resultado obtenidos.

El número de petequias aparecidas dentro del círculo es :

Menor de 10.

¿Han aparecido petequias fuera de la cara anterior del antebrazo? : No

¿Tienden a confluir la petequias ? No

Valoración de los resultados.

El resultado de la prueba es : Negativo.

¿Tiene el paciente una fragilidad capilar aumentada? No.

Práctica XLI : P3 (4/03/2015)

DETERMINACIÓN DEL TIEMPO DE PROTROMBINA (TP).

Fundamento.
En esta práctica el reactivo que vamos a utilizar es la tromboplastina histia y del calcio , que recibe el nombre de trombloplastina calcica.
El tromboplastina histica proviene de extractos de cerebro o pulmón de animales.

Materiales.

• Una gradilla.
• Cubeta de coagulómetro.
• Un trocito de acero.
• Rotulador de vidrio.
• Una micropipeta de 100 y 200 microlitros.
• Puntas de pipeta.
• Un coagulómetro.
• Un baño de agua.
• 2 tubos de ensayo de plastico.

Reactivos.

• Tromboplastina cálcica.

Muestra.

Plasma pobre en plaquetas (PPP).

Procedimiento.

Lo primero que hay que hacer es homogeneizar el reactivo sin agitarlo bruscamente.  También debemos atemperar el reactivo y la muestra para ellos podemos meterla en un baño a 37 º durante 5 minutos o tenerla en la mano duran unos minutos.Cuando la muestra  y el reactivo estén atemperados añadimos a una cubeta con una micropipeta 100 microlitros de plasma pobre en plaquetas, que previamente lo hemos conseguido centrifugando la sangre a 3000 rpm durante 10 minutos, y la rotulamos con la letra M; en otra cubeta añadimos 200 microlitros del reactivo (tromboplastina cálcica), el reactivo se tiene que incubar para ello lo colocamos en la celdas del coagulómetro durante 3 minutos. Colocamos la cubeta con la muestra y el reactivo en las celdas del coagulómetro y lo ponemos  en PTT. La cubeta con la muestra la debemos colocar en la celda de medida del coagulómetro y ponerle el tapón rojo encima, y se pulsa el botón de "RESERT" y  en ese momento se le añade con una micropipeta 200 microlitros del reactivo teniendo en cuenta que la punta de la pipeta no puede tocar el tapón rojo porque si lo toca el coagulómetro para de contar, cuando se le añade la tromboplastina cálcica se pone en marcha el magnetoagitador del coagulómetro y comienza la lectura de éste. Cuando se forma el coagulo el coagulómetro finaliza la lectura y nos indica el tiempo que pasa desde la adición de la tromboplastina cálcica.

Interpretación.

Hoja de trabajo.

1º. ¿Qué índice expresa la sensibilidad de una tromboplastina hística?

El ISI.

2º.¿ Cómo se llama la ratio de protrombina corregida?

Se denomina INR.

3º. ¿Cuál es el % normal de actividad de la protrombina?

El 100 -5 de actividad de protrombina.

4º. ¿En qué circunstancias se altera el TP?

Resultado obtenido.

TP de la muestra , en segundos:

37,2 segundos.

% de la actividad de la protrombina contenida en la muestra, obtenido mediante interpolación en la curva actividad preparada previamente:

50%

TP del plasma control normal no diluido (el de 100% de actividad ):

12,3 seg.

Ratio entre el TP de la muestra y el TP del control:

1,32

ISI de la tromboplastina hística utilizada:

1,24

INR=(TP del plasma del paiente/TP  de un plasma control anormal ) ^ ISI
INR = (37,2/12,3)^1,24=3,94

Valoración de os resultados.

La muestra ensayada tiene un TP:

Normal.