CONTAJE DE RETICULOCITOS. (27/11/2014)

MATERIALES.

• Microscopio.
• Tubos de hemolisis.
• Pipeta Pasteur.
• Portas.
• Baño de agua.
• Sistema de filtración.

REACTIVOS.

• Azul de cresil brillante en polvo.
• Solución salina al 0,9%
• Agua destilada.
• Aceite de inmersión.
• Citrato sódico al 3 %

Citrato sódico.

En el laboratorio había citrato sódico en polvo y necesitamos en líquido por tanto tuvimos que disolverla.Como nos dicen que es al 3% lo vamos a disolver en 100 ml.

Cogemos 3 gramos de citrato sódico---------> 100 ml de agua destilada.

Lo primero que vamos hacer es pesar son los 3 gramos de citrato sódico en polvo, lo que hacemos es colocar en la balanza el vidrio de reloj lo taramos y después vamos a pesar la sustancia hasta llegar a los 3 gramos. Cuando ya lo tengamos cogemos un vaso de precipitado y lo llenamos con agua destilada y disolvemos los 3 gramos de citrato sódico, a continuación con ayuda de un embudo los pasamos a un matraz aforado de 100 ml , pero antes de enrasarlo lo que haremos es volver a poner agua en el vaso de precipitado utilizado antes por si queda restos del polvo y lo vertemos en el matraz. Finalmente enrasamos el matraz.

MUESTRA.

Sangre anti coagulada.

FUNDAMENTO.

La finalidad de esta práctica es observar mediante un microscopio los reticulocitos mediante el colorante de azul de cresil brillante. Este colorante llevara a la precipitación del ARN y con ellos observaremos como filamentos de olor azul intenso en el interior de la célula.

PROCEDIMIENTO.

Lo primero que hacemos, una vez hayamos realizado la disolución de citrato sódico al 3 % en 100 ml de agua destilada, es preparar el colorante.  Esta preparación se realiza mezclando en un vaso de precipitado 80 ml de solución salina ( que ya teníamos en el laboratorio que habíamos hecho previamente )  y 20 ml de citrato sódico al 3% ; estas cantidades las tomamos con ayuda de pipetas.   Después pesamos 1g de azul de cresil brillante y lo disolvemos en la mezcla anterior. Este preparado lo tenemos que filtrar antes de utilizarlo. Posteriormente echamos 3 gotas de sangre y tres gotas de la solución . Lo mezclamos y lo tapamos con papel parafilm. Lo introducimos en el baño de agua durante 5 minutos.Una vez haya pasado este tiempo lo sacamos y con ayuda de una pipeta Pasteur tomamos un poco de la solución para realizar dos extensiones y la dejamos secar. Finalmente ponemos una gota de aceite de inmersión en la muestra y la observamos con el objetivo de 100x.

RESULTADO.

Lo hematíes son de color verde amarillento y los reticulocitos  presentan en su interior unos hilos finos de color azul.

% reticulocitos = ( Nº  de reticulocitos contados / Nº de hematíes contados ) x 100

HOJA DE TRABAJO.

1º ¿ Qué son los reticulocitos ?

Los reticulocitos son eritrocitos inmaduros que contienen, como su nombre indica, un retículo o red cromatínica formada por restos de ARN (ribosomas) , mitocondrias y otros órganos celulares.

2º¿ Qué tipo de tinción estamos utilizando ?

 Azul de cresil brillante.

3º¿Por qué hacemos la corrección del porcentaje de reticulocitos?

4º¿ Que nos expresa el IPR ?

Nos da un valor numérico de la estimulación hematopoyética por encima de la actividad de la línea base normal.