TINCIÓN DE GIEMSA. (11/11/2014)

MATERIAL.

• Microscopio 
• Portas limpios
• Cristalizador
• Puentes de tinción
• Pipeta Pasteur
• Frasco lavador
• Tubo de ensayo.

REACTIVOS.

1. Colorante en solución según Giemsa de Panrea.
2. Solución tampón pH 7.2 de Panrea.
3. Metanol.
4. Aceite de imersión.

MUESTRA.
Sangre venosa antioagulada.

FUNDAMENTO.
Utilizar como colorante la mezcla de azul de metileno y eosina propuesta por Giemsa.

PROCEDIMIENTO.
Lo primero que debemos de hacer es preparar un frotis, ya explicada en la práctica VII.  El frotis realizado lo tenemos que colocar de forma vertical sobre el punte de tinción en el cristalizador. Tenemos cubrir el frotis con metanol y dejarlo durante 3 minutos, se tiene que escurrir y secar con el aire con esto fijamos el frotis. A continuación diluimos en un tubo de ensayo 0.2 ml de azur-eosino-azul de metileno según Giemsa con 2 ml de solución tampón pH 7,2 este paso lo realizamos con pipetas. Mezclamos el tubo y con una pipeta pasteur  tomamos una cantidad de dilución de colorante y lo echamos encima del frotis , dejándolo actuar durante 25 minutos. Pasado los 25 minutos lo escurrimos y lo lavamos con agua de grifo, porteriormente lo lavamos con tampón pH 7,2 hasta eliminar los restos de colorante, lo dejamos escurrir y secarlo en posición vertical dentro del cristalizador.

Los eosinófilos se observan con el núcleo azul violeta, el citoplasma azul y los gránulos de olor rojo anaranjado. Los basófilos presentan un núcleo de color púrpura y granulación de color azul oscuro. Los monoitos y linfocitos se observan con un núcleo color violeta y el citoplasma azul.

HOJA DE TRABAJO.
 1º¿ Cuáles son los antioagulantes más adecuados para esta técnica?
La heparina y el EDTA.

2º¿Con que reactivo fijamos el frotis?
Con metanol.

3º¿ Cuánto tiempo debe actuar el colorante en el frotis ?
25 minutos.

RESULTADO.

Los eritrocitos son de color rosa asalmonado y las plaquetas de color violeta.