Práctica XXII:P2 (29/01/2015)

ELECTROFORESIS DE HEMOGLOBINAS.

Material.

• Tiras de cellogel 2,5x17 cm.
• Aplicador de electroforesis semimicro.
• Rodillo.
• Bandeja.
• Fuente de alimentación.
• Cubeta.
• Puente.
• Placa de vidrio.
• Cuatro pipetas parteur.
• Vaso de precipitado.

Reactivo.

• Suero fisiológico.
• Agua destilada.
• Solución decolorante: Solución Ácido acetico 5%.
• Solución transparentadora de electroforesis.
• Cloroformo ( troclorometano )
• Metanol
• Tampon pH 8,8.
• Colorante : Negro amido.

Muestra.

Sangre anticoagulada.

Procedimiento.

 Lo primero que hay que hacer es la preparación de la muestra que se prepara de la siguiente manera:

Lo primero que debemos de hacer es tomar 3 ml de sangre anti coagulada y depositarla en un tubo de centrifuga de cristal cónico graduado. 

Debemos de tener tres pipetas pasteur, una para el suero fisiologico, otra para sacar el sobrenadante y la última para mezclar.

Cuando tengamos la sangre en el tubo la centrifugamos a 3500 rpm durante 10  minutos, pasado este tiempo lo que hacemos es quitar el sobrenadante con la pipeta pasteur y poner 4 ml de suero fisiológico , lo mezclamos y lo volvemos a centrifugar. Esta operación la debemos de realizar dos veces más. En el último lavado lo que debemos de hacer es quitar el sobrenadante y  y depositar a la sangre que ha quedado en el tubo 0,5 ml de cloroformo que lo tomamos con una micropipeta de  50 microlitro y 1,5 ml de agua destilada que lo podemos hacer con una pipeta pasteur y por último lo mezclamos y lo centrifugamos a 3500 rpm durante 20 minutos.

 Lo importante es que el tubo tenga la misma cantidad que un segundo tubo para enfrentarlo en la centrifugadora.

Pasado los 20 minutos tenemos que coger el sobrenadante y depositarlo en otro tubo de ensayo, este sobrenadante sera la muestra con la que vamos a trabajar.

Ahora se realizara la electroforesis.

Tenemos que colocar la fuente de alimentación, la cubeta y los electrodos correctamente. 

Ponemos el tampon en la cubeta y ahi se colocara las tiras que previamente sacaremos del frigorífico con las pinzas y la colocaremos en la cubeta con tampon durante 10 minutos. Sacamos las tiras y las secamos con papel de filtro y la montamos en el puente con la cara absorbante hacia arriba es decir poniendo la esquina cortada en la derecha mirando hacia la persona y  los dos extremos tocando el tampon , para ellos los extremos deben pasar por las ranuras del puente..

Aplicación de la muestra.

A la tira le hacemos una línea con lápiz en el extremo catodico y con una capilar debajo de la señal hacemos una linea pero con la sangre esta linea debe ser muy fina y con poca sangre.

Después ponemos el punte dentro de la cubeta y ponemos en marcha el alimentador a 400 voltios durante 10 minutos.

Cuando ya ha terminado la electroforesis debemos desconectarlo y sacamos las tiras con unas pinzas y la depositamos en una cubeta que previamente la hemos llenado con negro amido durante 10 minutos y tiene que estar constantemente agitandose. Cuando termine debemos retirar el negro amido y ponemos la tira en otro cubeta llenada con ácido acetico 5% durante 10 minutos y debe estar agitandose , este paso se debe hacer 3 veces. Hecho tres veces este paso lo ponemos en la cubeta con metanol durante 1 minuto y finalmente la ponemos en la cubeta con la sulución transparentadora durante 2 minutos. En todos estos pasos la cara absorbente de la tira debe estar hacia abajo.

 Pasado este tiempo la ponemos en la placa de vidrio con la cara absorbente hacia abajo y la aplastamos con el rodillo . Metemos al estufa 60 ºC hasta que la tira quede transparente.

Resultado.

Resultado de la electroforesisis.

No tiene ninguna anomalía.

Hoja de trabajo.

1º. ¿De qué material son las tiras empleadas en esta técnica ?

2º. ¿Cuál es el decolorante del rojo Ponceau ?

El decolorante es una solución acuosa de ácido acético al 5 %.

3º. ¿Cómo se llama el aparato que lee las bandas de las tiras y las transforma en curvas de área mensurable?

Se llama fotodensitómetro.

4º. ¿En qué enfermedad aparece una banda electroforética de Hb S?

En la anemia falciforme heterocigótica.

5º. ¿Cuál es la Hb normal más electronegativa?

Hb A2

Práctica XVIII: P2 (26/01/2015)

CÁLCULO DE LOS ÍNDICES ERITROCITARIOS.

• RECUENTO RBC.
• HTO.
• Hb.

Fundamento.

Para realizar los índices eritrocitario debemos obtener los resultados de las prácticas de recuento de hematíes, hematocrito y determinación cuantitativa de hemoglobina.

Materiales.
Recuento RBC.

• Una pipeta de Thoma para glóbulos rojos.
• Un tubo de goma con boquilla.
• Una cámara de recuento.
• Un cubre.
• Un microscopio.
• Papel de filtro
• Tubo de ensayo.
• Gradilla.

HTO.

• Dos tubos capilares.
• Plastilina.
• Gasa.
• Una centrífuga de microhematocrito.
• Una regla milimetrada o un lector de microhematocrito.

Hb.

• cuatro tubos de ensayo.
• Gradilla.
• Micropipeta.
• Vaso de precipitado.
• pipeta de 5 ml o pipeta pasteur.
• Espectrofotómetro.

Reactivos.
Recuento RBC.

Líquido de dilución. El que vamos a utilizar, que es el más utilizado, es el de Hayem.

El líquido de Hayem se compone de:

• 2,5 g de sulfato sódico.
• 0,5 g de cloruro sódico.
• 0,25 g de cloruro mercurio.
• 100 ml de agua  destilada.

Para la limpieza de la pipeta de Thoma necesitaremos.

• Agua corriente.
• Agua destilada.
• Alcohol.

HTO.

Cuando realice esta práctica no utilice ningún reactivo solo utilizamos un capilar.

HB
Hemoglobin 50x.

• Ferrianuro de potasio 0,60 mmol/L
• Cianuro de potasio    77 mmol/L
• Dihidrogeno fosfato de potasio 2 mmol/L

Muestra.

Sangre venosa obtenida de dos bolsas de sangre distintas.

Procedimiento.

La primera practica que realice fue la de hematocrito.

1. Tomamos la sangre en un tubo de ensayo.
2. Llenamos dos capilares con sangre venosa solo las 3/4 partes de su longitud,
3. Lo centrifugamos a 12000 g durante 5 minutos.
4. Calculamos su porcentaje ya sea con la regla o con el lector.

 Obtención de sangre para uno de los capilares

.

 Los dos capilares después de meterlos en la centrifugadora.

Calculando el porcentaje con el lector.

La segunda que realice fue recuento de hematíes.

• Ponemos en un tubo de ensayo sangre y en otro el líquido de dilución.
• Con la pipeta de Thoma tomamos sangre hasta la señal de 1, después limpiamos la parte externa con una gasa.
• Tomamos ahora el líquido de dilución hasta la señal 101.
• Después lo mezclamos tomando la pipeta con los dedos índice y pulgar durante 3 minutos.
• Desechamos las tres primeras gotas
• Tomamos la cámara de recuento y le colocamos el cubre mojando un dedo y pasándolo por los bordes que se encuentra en la mitad de la cámara.
• Por último ponemos la pipeta en la mitad para introducir la mezcla entre la cámara y el cubre.
• Lo observamos con el objetivo de 40x.
• Y por último contamos los hematíes presentes en los  cuatro cuadros de los extremos y el central

Hematíes en uno de los cuadrados grande.

Forma de contar los hematíes.

Forma de verter el líquido entre el cubre y la cámara.

La última  que realice fue la determinación cuantitativa de hemoglobina.

• Cogemos cuatro tubos de ensayo.
• A cada uno de ellos le escribimos un nombre (blanco, patrón, muestra 1 y muestra 2).
• Tomamos sangre de dos bolsas de sangre diferentes.
• En un vaso de precipitado ponemos el reactivo de trabajo.
• Añadimos al blanco, patrón, muestra 1 y muestra 2, 5 ml de reactivo de trabajo.
• Añadimos 10 microlitros de calibrador al patrón y mezclamos con la micropipeta
• Añadimos 10 microlitros de muestra al tubo muestra 1 y muestra 2 y mezclamos con la micropipeta.
• Dejar 3 minutos a temperatura ambiente.
• Por último llevar al espectrofotómetro.

Utilización del espectrofotómetro.

Resultados.
HTO :
 El primer capilar = 45%
El segundo capilar = 48%

RBC :

El primer recuento = 4400000 millones /mm3
El segundo recuento =3815000 hematíes/mm3

[Hb] :

Muestra 1 = 1,061
Muestra 2 =1,344

Índices eritrocitarios.

• Volumen corpuscular merdio ( VCM).

VCM = HTO / RBC.

• Hemoglobina corpuscular medio ( HCM)

HCM= [Hb] / RBC.

• Concentración de hemoglobina corpuscular medio.

CHCM = [Hb] / HTO.

RESULTADOS.

Ejercicio 1.

• VCM =(45/4400000 )x10 = 1,022 ·10^-4 fl
• HCM = (1,061 /4400000) x10 = 2,41·10^ -6 pg
• CHCM= (1,061/45) x100 = 2,35 g/dl.

Ejercicio 2.

• VCM = ( 48/3815000)X 10 = 0,00012 fl 
• HCM = (1,344 / 3815000)X 10 = 3,52 · 10^-6
• CHCM = (1,344 / 48)X100)= 2,8 g/ dl.

Práctica XVII: P3 (19/01/2015)

DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE HEMOGLOBINA IVD.

Fundamento.

Esta práctica se basa en obtener unos valores mediante el espectrofotómetro.

Materiales.

• Tubo de ensayo.
• Pipeta.
• Micropipeta.
• Vaso de precipitado.
• Espectrofotómetro.

Reactivos.

Hemoglobin 50x

Ferricianuro de potasio   0,60 mmol/L. Cianuro de potasio           77 mmol/L. Dihidrogeno fosfato de potasio   2 mmol/L.

Hemoglobin cal

Patrón de hemoglobina 15 g/ dL

Hemoglobin cal.

Hemoglobin 50x.

Muestra.

Sangre venosa.

Procedimiento.

Lo primero que hay que hacer es preparar el reactivo. Tenemos que preparar 250 ml de reactivo de trabajo.
Para ello debemos verter en un vaso de precipitado el reactivo, de ahí tomamos 5 ml con una pipeta y lo vertemos en un matraz aforado de 250 ml, despúes con un embudo pasamos 245 ml de agua destilada al matraz y lo enrasamos con ayuda de una pipeta pasteur hasta la señal.

 Tomamos los 5 ml de reactivo.

Tomando el agua destilada.

Después de la preparación del reactivo de trabajo (RT) tenemos que tomar 4 tubos de ensayo y escribir a uno blanco, a otro patrón, a otro muestra 1 y al último muestra 2 y en un vaso de precipitado añadir reactivo de trabajo. Tenemos que añadir con una pipeta 5 mL de reactivo de trabajo a cada uno de los tubos de ensayo (blanco, patrón, muestra 1 y muestra 2), le añadir 10 microlitros del calibrador al tubo nombrado como patrón eso lo realizamos con una micropipeta y por último añadimos 10 microlitros de muestra a los tubos de ensayo llamados muestra 1 y muestra 2 también con una micropipeta . Cuando añadimos aun tubo mas de una sustancia lo tenemos que mezclar con ayuda de una micropipeta.

Lo dejamos 3 minutos a temperatura ambiente , pasado este tiempo lo llevamos al espectrofotómetro.

	Blanco.	Patrón.	Muestra 1.	Muestra 2.
RT (mL)	2,5	2,5	2,5	2,5
Calibrador (uL)	--	10	--	--
Muetra (uL)	--	--	10	10

Estando en el espetrofotómetro lo primero que hacemos después de prenderlo es poner la fecha y aplastar enter, pulsamos el número 1 ( absorbancia ), pulsamos el número 1 (monocromática), pulsamos el número 5 (540 nm ) y enter , volumen muestra pulsamos número 100 y enter, tiempo pulsar el número 0 y enter, temperatura pulsar el número 0 y enter, después introducimos el blanco y pulsamos PUMP , introducimos el patrón y pulsamos PUMP, introducimos muestra 1 y pulsar PUMP y por último introducimos la muestra 2 y pulsar PUMP y lo último que introducimos en agua destilada y mantenemos pulsamos WASH hasta que absorba toda el agua. Cuando introducimos el blanco RT, patrón, blanco muestra y muestra tenemos que esperar hasta que lo absorba dos veces para retirarlo y en cada absorbida saldrá unos valores que son los resultados.

Por otra parte cuando ya tenemos uno de los tubos de ensayo con 0,5 ml de patrón con una micropipeta de 500 uL, lo que debemos de hacer es tomar 0,25 ml del primer tubo y añadirlo a otro tubo diferente y ha este tubo se el añade 0,25 ml de agua destilada y por último tomamos 0,25 ml de este último tubo lo añadimos a un tercer tubo y a este se le añade 0,25 ml de agua.Finalmente estos tres tubos patrones se llevan al espectrofotómetro para obtener el resultado de su absorbancia. 

Resultado.

Patrón 15 g/dL =0,132
Patrón 1/2=0,059
patrón 1/4 = 0,049

Patrón1 ------ > [Hb] = 15 g/dL. ; A540 = 0,136

Patrón 2-------> [Hb] = 7,5 g/dL ; A540 = 0,069

Patrón 3--------> `[Hb] = 3,75 g/dL ; A540 = 0,056

La recta.

Cálculos:
Muestra = 0,056.

• Con factor.

(A) Muestra x 36,77 = g/dL de hemoglobina en la muestra.
(A) 0,056 x 36,77=2,05912 g/dL de hemoglobina en la muestra.

• Con patrón.

((A) Muestra / (A)Patrón ) x 15= g/dL de hemoglobina en la muestra.

(0,056 /0,069) x 15 =12,174 g/dL de hemoglobina en la muestra.

Hoja de trabajo.
1º ¿ En qué se basan los métodos de determinación de la hemoglobina?
Se basa en la transformación de la hemoglobina en cianmetahemoglobina mediante los siguientes pasos:
En primer lugar el Fe 2+ de la hemoglobina, en presencia de ferricianuro potásico, se oxida a Fe3+ , dando lugar a la metahemoglobina.
Posteriormente, y en presencia de cianuro potásico, la metahemoglobina pasa a cianmetahemoglobina. Éste es un compuesto estable, de color rojo, con un pico de absorción máximo a 540 nm y cuya concentración puede ser determinada por métodos colorimétros empleando un patrón de concentración conocida.

2º¿ Cuál es el método recomendado por el Comité internacional para la estandarización de la Hematología ?
El comité internacional para la estandarización de la hemoglobina recomienda el método colorimétrico de la cianmetahemoglobina por su exactitud y precisión, y por la posibilidad de utilizar un patrón de referencia internacional muy estable que sirve para verificar los resultados obtenidos en el laboratorio, y elaborar curvas de calibración.


Valoración de los resultados.
El resultado esta dentro de los valores normales.

Práctica XIX: P2 (22/01/2015).

DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE HIERRO IVD.

Materiales.

• Gradilla.
• Cuatro tubos de ensayo.
• Una micropipeta de 1000 microlitros.
• Vaso de precipitado.
• Una pipeta.
• Espectofotometro.

Reactivos.

R1 Tampón	Acetato pH 4,9                  100mmol/L
R2 Reductor.	Ácido ascórbico                99,7%
R3 Color.	FerroZine                            40 mmol/L
IRON CAL.	Patrón primario acuoso de Hierro   100 ug/dL

IRON CAL.

 Ácido ascórbico.

 Acetato pH 4,9

Muestra.

Sangre.

Procedimiento.

Lo primero que debemos de hacer es preparar el reactivo de trabajo (RT), este reactivo se prepara disolviendo el tubo de R2 Reductor ( Ácido ascórbico 99,7% ) en el frasco de R1 Tampón ( Acetato pH 4,9  100mmol/L) , tapamos R1 y lo  mezclamos para que se disuelva correctamente R2 con R1, este sera RT ( reactivo de trabajo ) y también tenemos que poner en un vaso de precipitado agua destilada y tenemos que tener a mano la muestra que es el plasma.

Realizado ya el reactivo de trabajo lo que vamos hacer es coger cuatro tubos de ensayo, y escribirle a uno  Blanco RT, a otro Patrón , a otro blanco muestra y al último muestra. Después con una micropipeta añadimos 1 mL (1000 microlitros ) al Blanco RT, patrón, blanco muestra y muestra; también vamos a añadir una gota de R3 color ( Ferrozine  40mmol/ L) al tubo blanco RT, al patrón y a la muestra. Con una micropipeta añadimos 200 microlitros de agua destilada  al blanco RT , le cambiamos la punta y con la misma micripipeta añadimos 200 microlitros de patrón al tubo de patrón y por último añadimos 200 microlitros de muestra a blanco muestra y muestra. Tenemos que tener en cuenta que cuando le añadimos a los tubos mas de una sustancia lo tenemos que mezclar con la micropipeta.

La muestra se debe mantener durante 10 minutos a temperatura ambiente.

	Blanco RT	Patrón	Blanco muestra	Muestra
RT (mL)	1,0	1,0	1,0	1,0
R3 (gotas)	1	1	--	1
Agua destilada (uL)	200	--	--	--
Patrón (uL)	--	200	--	--
Muestra (uL)	--	--	200	200

Con los cuatro tubos de ensayo con sus respectivo nombres vamos al espectrofotómetro y lo primero que hacemos después de prenderlo es poner la fecha y aplastar enter, pulsamos el número 1 ( absorbancia ), pulsamos el número 1 (monocromática), pulsamos el número 5 (540 nm ) y enter , volumen muestra pulsamos número 100 y enter, tiempo pulsar el número 0 y enter, temperatura pulsar el número 0 y enter, después introducimos el blanco y pulsamos PUMP , introducimos el patrón y pulsamos PUMP, introducimos blanco muestra y pulsar PUMP y por último introducimos la muestra y pulsar PUMP y lo último que introducimos en agua destilada y mantenemos pulsamos WASH hasta que absorba toda el agua. Cuando introducimos el blanco RT, patrón, blanco muestra y muestra tenemos que esperar hasta que lo absorba dos veces para retirarlo y en cada absorbida saldra unos valores que son los resultados.

Procedimiento de utilización del espectrofotómetro.

Resultado.
Blanco RT =0,196
Patrón =0,075
Blanco muestra=0,069
Muestra =0,1

((Muestra-Blanco muestra)/Patrón))x100
((0,1-0,069)/0,075 )x100 = 41,33 %

Hoja de trabajo.
1º. ¿Cuál es el reactivo cromógeno de esta técnica?

2º. ¿Por qué tenemos un tubo BR?

3º. ¿Qué muestras no son válidas?

Práctica XIV: P2 (21/11/2014)

DETERMINACIÓN DEL VALOR HEMATOCRITO MEDIANTE EL MICROMÉTODO.

Fundamento.
El hematocrito consiste en centrifugar una capilar con sangre a 2000 rpm durante 5 minutos.

Materiales.

• Dos tubos capilares.
• Plastilina.
• Gasa.
• Una centrífuga de microhematocrito.
• Una regla milimetrada o un lector de microhematocrito.

REACTIVOS.

Cuando realicé esta práctica no utilice ningún reactivo solo utilizamos un capilar.

MUESTRA.

Sangre venosa.

PROCEDIMIENTO.

Lo primero que hacemos es llenar un tubo de ensayo con sangre venosa. En esta práctica debemos realizar dos determinaciones. Tenemos que llenar cada uno de los tubos capilares con la sangre venosa extraída de la bolsa de sangre hasta  3/4 de la longitud total del capilar, este llenado se realiza poniendo un extremo del capilar en contacto con la sangre que hay en el tubo de ensayo, tenemos que inclinar un poco el tubo de ensayo con sangre para facilitar el llenado del capilar. Limpiamos el exterior del capilar con una gasa, sellamos el extremo de cada tubo por el que ha entrado la sangre con plastilina; para ello atravesamos el capilar en la plastilina. Colocar los dos tubos perfectamente equilibrados en la centrifugadora. Colocando el extremo que tiene la plastilina hacia afuera y adecuadamente encajado en sus surcos. Por ultimo centrifugamos los tubos durante 5 minutos.

RESULTADO.
El resultado lo podemos obtener con ayuda de una regla milimetrada o con un lector mirohematocrito.

Capilar después de centrifugarlo.

• Resultado obtenido con ayuda de una regla.

Forma de calcular el valor hematocrito mediante una regla.

Con una regla tenemos que medir la zona formada por eritrocitos teniendo en cuenta que no se debe medir la parte con plastilina y también medimos la parte formada por plasma.

Teniendo estos datos podemos sacar el porcentaje que le corresponde a la columna de eritrocitos con una regla de tres.

SI T ----- 100 %    E ------ HCT HCT = (EX100)/ T

E= Longitud en mm de la columna de eritrocitos.

T=Longitud en mm de la columna total de sangre.

DATOS.

E= 25 mm

T=55 mm

Si 55 mm -------- 100%

     25mm ---------x

x=(25x100) /55 = 45,45 %

• Resultado obtenido con un lector de microhematocrito.

Lo primero que tenemos que hacer es situar el capilar en la ranura, el extremo donde están lo eritrocitos tiene que ir hacia el punto rojo. 

Después debemos girar el disco que se encuentra en el centro hasta hacer coincidir la linea central con la parte donde se separa el plasma y los eritrocitos, la parte que esta alejada del punto rojo tiene que coincidir con el final de la columna donde esta el plasma, y la línea que esta cerca del punto rojo tiene que hacer coincidir con el inicio de la columna de los eritrocitos teniendo en cuenta que la plastilina no se debe contar.

El resultado que me salio es igual al anterior: 45 , 45%

INTERPRETACIÓN.
Salio 45,45 ; por tanto no tiene anemia.

HOJA DE TRABAJO.

1º ¿Qué significa la franja roja que tiene algunos apilares de microhematocrito?

Significa que son capilares heparinizados.

2º ¿A qué fuerza relativa de centrifugación (g) se centrifuga la sangre ?

A 12.000g o 1500g

3º Si la medida de la columna de eritrocitos es de 20 mm y la de la columna total es de 50 mm,¿cuál es el valor del hematocrito?

SI T ----- 100 %

   E ------ HCT

50 mm ------ 100%

20 mm -------- x

x= (20x100) / 50 = 40%

4º Si con un capilar se obtiene un HCT de 45 y con el otro uno de 43,¿ cómo debe ser la forma de actuar ante estos resultados?
Se deberá repetir la practica, pero centrifugarlo 10 minutos más.

Resultado obtenido.

	E	T	HCT-R	HCT-L
Primer tubo capilar	25mm	55mm	45,5 %	45 %
Segundo tubo capilar.	23mm	53 mm	43,39%	43%

E= Longitud en mm de la columna de eritrocitos.

T=Longitud en mm de la columna total de sangre.

HCT-R = HCT calculado con una regla.

HCT-L= HCT calculado con un lector.

• 2% del valor mayor de HCT = 
• Diferencia entre ambos valores de HCT =  Se diferencian en un 2%.
• ¿ Son validos los resultados obtenidos? =Si son validos.
• En el caso positivo, ¿ cuál es el valor final de la determinación? = 44%

Valoración de los resultados.

• ¿Ha de prolongarse la centrifugación hasta  10 minutos ? = En el caso de que si lo centrifugamos durante 5 minutos y pasado este tiempo no se haya separado adecuadamente el plasma de los eritrocitos si de tendrá que prolongar hasta 10 minutos, y también si el valor de HCT es superior a 50.
• El valor final de la determinación indica que el HCT es: Normal.

Práctica XII : P2 (20/11/2014)

VISUALIZACIÓN DE UNA CÁMARA DE RECUENTO.

Materiales.

• Un microscopio.
• Una cámara de recuento.

Procedimiento.

1.Lo primero que hay que  hacer es colocar la cámara de recuento en la platina y observar con el microscopio el retículo de la cámara de recuento. Primero lo observamos con el objetivo de menor aumento (4x);luego con el objetivo de mediano aumento (10x);después con el objetivo de gran aumento (40x)

2. Lo tenemos que enfocar, con el obetivo de 10x, uno de los cuadrados grandes situado en las cuatro esquinas del retículo. Tenemos que contar el número de cuadrados medianos contenido en ese cuadro grande:

Teniendo en cuenta que la longitud de cada uno de los lados del retículo es de 3 mm, tengo que calcular:

• La longitud de los lados de cada cuadrado grande periférico:3/3=1mm
• La longitud de los lados de cada uno de los cuadrados medianos englobados en un cuadro grande periférico:1/4=0,25mm

Teniendo en cuenta que la longitud del espacio comprendido entre el retículo y el cubre es de 0,1mm, calcular el volumen de sangre diluida que hay en la cámara de recuento montada, a nivel de :

• El retículo entero : 3x3x0,1=0,9mm3
• Un cuadrado grande periférico: 1x1x0,1=0,1mm3
• Un cuadrado mediano incluido en un cuadrado grande periférico: 0,25x0,25x0,1= 0,00625mm3

3.  Ahora hay que enfocar,con el objetivo de 10x, el cuadrado grande central.

•  Contar el número de cuadrados medianos contenidos en ese cuadrado grande central:25 cuadrados
• Contar el número de cuadrados pequeños englobados en uno de esos cuadrados medianos:16 cuadrados

Teniendo en cuenta que la longitud de cada uno de los lados del retículo es de 3mm, calcular:

• La longitud de los lados del cuadrado grande central: 1mm
• La longitud de los lados de cada uno de los cuadrados medianos incluidos en el cuadrado grande central:0,2 mm
• La longitud de los lados de cada uno de los cuadrados pequeños contenidos en uno de esos cuadrados medianos:0,05mm

Sabiendo que la longitud del espacio comprendido entre el retículo y el cubre es de 0,1 mm, calcular el volumen de sangre diluida que hay en la cámara de recuento montada, a nivel de;

• El cuadro grande central: 1x1x0,1 = 0,1mm3
• Un cuadrado mediano englobado en el cuadrado grande central:0,2x0,2x0,1 =0,004mm3
• Un cuadrado pequeño incluido en uno de esos cuadrados medianos:0,05x0,05x0,1 = 0,00025 mm3