Práctica XVIII: P2 (26/01/2015)

CÁLCULO DE LOS ÍNDICES ERITROCITARIOS.

• RECUENTO RBC.
• HTO.
• Hb.

Fundamento.

Para realizar los índices eritrocitario debemos obtener los resultados de las prácticas de recuento de hematíes, hematocrito y determinación cuantitativa de hemoglobina.

Materiales.
Recuento RBC.

• Una pipeta de Thoma para glóbulos rojos.
• Un tubo de goma con boquilla.
• Una cámara de recuento.
• Un cubre.
• Un microscopio.
• Papel de filtro
• Tubo de ensayo.
• Gradilla.

HTO.

• Dos tubos capilares.
• Plastilina.
• Gasa.
• Una centrífuga de microhematocrito.
• Una regla milimetrada o un lector de microhematocrito.

Hb.

• cuatro tubos de ensayo.
• Gradilla.
• Micropipeta.
• Vaso de precipitado.
• pipeta de 5 ml o pipeta pasteur.
• Espectrofotómetro.

Reactivos.
Recuento RBC.

Líquido de dilución. El que vamos a utilizar, que es el más utilizado, es el de Hayem.

El líquido de Hayem se compone de:

• 2,5 g de sulfato sódico.
• 0,5 g de cloruro sódico.
• 0,25 g de cloruro mercurio.
• 100 ml de agua  destilada.

Para la limpieza de la pipeta de Thoma necesitaremos.

• Agua corriente.
• Agua destilada.
• Alcohol.

HTO.

Cuando realice esta práctica no utilice ningún reactivo solo utilizamos un capilar.

HB
Hemoglobin 50x.

• Ferrianuro de potasio 0,60 mmol/L
• Cianuro de potasio    77 mmol/L
• Dihidrogeno fosfato de potasio 2 mmol/L

Muestra.

Sangre venosa obtenida de dos bolsas de sangre distintas.

Procedimiento.

La primera practica que realice fue la de hematocrito.

1. Tomamos la sangre en un tubo de ensayo.
2. Llenamos dos capilares con sangre venosa solo las 3/4 partes de su longitud,
3. Lo centrifugamos a 12000 g durante 5 minutos.
4. Calculamos su porcentaje ya sea con la regla o con el lector.

 Obtención de sangre para uno de los capilares

.

 Los dos capilares después de meterlos en la centrifugadora.

Calculando el porcentaje con el lector.

La segunda que realice fue recuento de hematíes.

• Ponemos en un tubo de ensayo sangre y en otro el líquido de dilución.
• Con la pipeta de Thoma tomamos sangre hasta la señal de 1, después limpiamos la parte externa con una gasa.
• Tomamos ahora el líquido de dilución hasta la señal 101.
• Después lo mezclamos tomando la pipeta con los dedos índice y pulgar durante 3 minutos.
• Desechamos las tres primeras gotas
• Tomamos la cámara de recuento y le colocamos el cubre mojando un dedo y pasándolo por los bordes que se encuentra en la mitad de la cámara.
• Por último ponemos la pipeta en la mitad para introducir la mezcla entre la cámara y el cubre.
• Lo observamos con el objetivo de 40x.
• Y por último contamos los hematíes presentes en los  cuatro cuadros de los extremos y el central

Hematíes en uno de los cuadrados grande.

Forma de contar los hematíes.

Forma de verter el líquido entre el cubre y la cámara.

La última  que realice fue la determinación cuantitativa de hemoglobina.

• Cogemos cuatro tubos de ensayo.
• A cada uno de ellos le escribimos un nombre (blanco, patrón, muestra 1 y muestra 2).
• Tomamos sangre de dos bolsas de sangre diferentes.
• En un vaso de precipitado ponemos el reactivo de trabajo.
• Añadimos al blanco, patrón, muestra 1 y muestra 2, 5 ml de reactivo de trabajo.
• Añadimos 10 microlitros de calibrador al patrón y mezclamos con la micropipeta
• Añadimos 10 microlitros de muestra al tubo muestra 1 y muestra 2 y mezclamos con la micropipeta.
• Dejar 3 minutos a temperatura ambiente.
• Por último llevar al espectrofotómetro.

Utilización del espectrofotómetro.

Resultados.
HTO :
 El primer capilar = 45%
El segundo capilar = 48%

RBC :

El primer recuento = 4400000 millones /mm3
El segundo recuento =3815000 hematíes/mm3

[Hb] :

Muestra 1 = 1,061
Muestra 2 =1,344

Índices eritrocitarios.

• Volumen corpuscular merdio ( VCM).

VCM = HTO / RBC.

• Hemoglobina corpuscular medio ( HCM)

HCM= [Hb] / RBC.

• Concentración de hemoglobina corpuscular medio.

CHCM = [Hb] / HTO.

RESULTADOS.

Ejercicio 1.

• VCM =(45/4400000 )x10 = 1,022 ·10^-4 fl
• HCM = (1,061 /4400000) x10 = 2,41·10^ -6 pg
• CHCM= (1,061/45) x100 = 2,35 g/dl.

Ejercicio 2.

• VCM = ( 48/3815000)X 10 = 0,00012 fl 
• HCM = (1,344 / 3815000)X 10 = 3,52 · 10^-6
• CHCM = (1,344 / 48)X100)= 2,8 g/ dl.